Черника состав преобладает лимонная кислота. Черника: польза, вред, состав, рецепты блюд

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакогностическое исследование плодов и побегов черники обыкновенной

На правах рукописи

Рязанова Татьяна Константиновна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПЛОДОВ И ПОБЕГОВ ЧЕРНИКИ ОБЫКНОВЕННОЙ

тсамим муятишб и

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Самара - 2014

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Куркин Владимир Александрович Официальные оппоненты:

Копомиец Наталья Эдуардовна, доктор фармацевтических наук, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакогнозии с курсами ботаники и экологии, профессор кафедры Пурыгим Петр Петрович, доктор химических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный университет», кафедра органической, биоорганической и медицинской химии, заведующий кафедрой

Ведущая организация:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится 5 декабря 2014 г. в 12:00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (443079, г. Самара, пр. К. Маркса, 165Б).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (443001, г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171; http://www.samsmu.ru/science/referats/2014/ryazanova)

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук,

Петрухина Ирина Константиновна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Растения являются одним из важнейших источников биологически активных соединений (БАС), находящих широкое применение в различных областях промышленности, однако особое значение имеет опыт их применения в медицине (Киселева Т.Л., 2009; Куркин В.А., 2009; Самылина И.А. и др., 2007; 2010). Отличительной особенностью многих препаратов растительного происхождения имеет комплексный и взаимодополняющий характер действия совокупности содержащихся в них БАС (Киселева Т.Л., 2009; Куркин В.А., 2009; Самылина И.А. и др., 2004; 2007).

Одним из ценным источников лекарственных препаратов является черника обыкновенная (Vaccinium myrtillus L.) - растение, широко используемое в народной и официнальной медицине. Фармакопейным сырьем являются плоды и побеги (Государственный реестр лекарственных средств, 2014). Однако более широкое применение в составе препаратов на фармацевтическом рынке получили именно плоды черники благодаря разнообразию своего химического состава. Плоды черники обыкновенной - растительное сырье, накапливающее значительное количество антоцианов, соединений, обладающих антиоксидантной, антиагрегантной, ангиопро-текторной, противовоспалительной активностью. Подобная активность антоцианов обусловливает их применение при комплексной терапии офтальмологических заболеваний (миопия, возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия) (Киселева Т.Н., 2007; Егоров Е.А., 2004). Побеги черники обыкновенной используются в составе противодиабети-ческих сборов («Арфазетин-Э», «Арфазетин-ЭК») (Государственный реестр лекарственных средств, 2014).

И для плодов, и для побегов черники обыкновенной недостаточно проработана стандартизация по группам действующих соединений. На данный момент в России существует фармакопейная статья (Государственная Фармакопея СССР XI издания, вып. 2) только на плоды черники воздушно-сухие, в то время как в европейских странах регламентируется качество как воздушно-сухих, так и свежих плодов, при этом в качестве источника антоцианов применяются только свежие плоды. Следует отметить, что и используемая в Российской Федерации фармакопейная статья (ФС) на плоды черники не соответствует современным требованиям к стандартам качества на ЛРС; в частности, не регламентируется количественное содержание действующих веществ, отсутствует ряд других показателей (Отраслевой стандарт 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения»). Возможно, с отсутствием содержащих современные требования стандартов качества на свежие плоды черники обыкновенной связаны немногочисленность отечественных лекарственных препаратов на их основе и

преобладание дорогостоящих импортных лекарственных средств («Стрикс», «Миртилене форте»).

Качество побегов оценивают по содержанию дубильных веществ, хотя по литературным данным известно, что в побегах также содержатся флавоноиды, которые являются более лабильной группой БАС, и соответственно их содержание является более достоверным показателем качества обработки сырья.

В связи с этим актуальным является более углубленное фармакогности-ческое исследования плодов и побегов черники обыкновенной для обоснования подходов к методам стандартизации сырья, а также проведение химико-фармацевтических исследований по разработке состава лекарственных препаратов из плодов черники. Решение поставленных задач будет способствовать реализации Стратегии развития фармацевтической промышленности Российской Федерации на период до 2020 года, утвержденной приказом Минпромторга России № 965 от 23.10.2009 г.

Цель работы и основные задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое исследование плодов и побегов черники обыкновенной, направленное на разработку и усовершенствование методов стандартизации сырья и препаратов на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести анатомо-гистологическое исследование различных органов черники обыкновенной и других морфологически сходных видов лекарственного растительного сырья.

2. Провести сравнительное фитохимическое исследование различных органов черники обыкновенной, а также сравнение с другими морфологически сходными видами ЛРС.

3. Изучить химический состав плодов и побегов черники обыкновенной.

4. Разработать методики качественного и количественного анализа БАС в сырье черники обыкновенной.

5. Разработать проекты фармакопейных статей на черники обыкновенной плоды воздушно-сухие, черники обыкновенной плоды свежие и черники обыкновенной побеги.

6. Провести химико-фармацевтическое исследование по обоснованию состава препаратов из плодов и побегов черники обыкновенной («Черники обыкновенной сироп», «Черники обыкновенной пастилки», «Черники обыкновенной таблетки», «Черники побегов настойка»).

7. Разработать методики качественного и количественного анализа экспериментальных препаратов на основе ЛРС черники.

8. Провести фармакологические исследования по изучению влияния экспериментальных лекарственных препаратов из плодов и побегов черники обыкновенной на выделительную функцию почек крыс.

Научная новизна. С использованием оптической микроскопии получены микрофотографии, отражающие диагностические признаки побегов черники обыкновенной. Впервые проведено сравнительное анатомо-гистологи-ческое и фитохимическое исследование побегов черники с морфологически сходными, потенциально примесными видами (толокнянка обыкновенная, брусника обыкновенная).

Из плодов черники обыкновенной выделены и идентифицированы три соединения антоциановой природы: З-О-глюкозиды цианидина, мальвиди-на и дельфинидина. Впервые определен удельный показатель поглощения цианидина-З-О-глюкозида в 0,5% растворе аммиака в 95% спирте этиловом. Из побегов черники обыкновенной выделены и идентифицированы кверце-тин-З-О-ксилопиранозид, кофейная кислота и даукостерин, (3-ситостерин, из которых даукостерин впервые обнаружен в чернике, а кверцетин-З-О-кси-лопиранозид выделен впервые из черники, произрастающей на территории Российской Федерации.

Разработаны методические и методологические подходы к стандартизации свежих и воздушно-сухих плодов, а также препаратов черники обыкновенной, заключающиеся в оценке суммы антоцианов в пересчете на циа-нидин-З-О-глюкозид методом прямой спектрофотометрии в 95% этиловом спирте, содержащем 1% хлороводородной кислоты. Впервые разработана методика количественного определения антоцианов в ЛРС методом дифференциальной спектрофотометрии в 0,5% растворе аммиака в 95% спирте этиловом при аналитической длине волны 623 нм на фоне исходного раствора без добавления аммиака, разведенного аналогичным образом.

Обоснованы подходы к стандартизации побегов черники обыкновенной по сумме флавоноидов в пересчете на рутин методом дифференциальной спектрометрии с алюминия хлоридом при аналитической длине волны 420 нм.

Предложен состав и способ получения лекарственных препаратов «Черники обыкновенной таблетки», «Черники обыкновенной пастилки», «Черники побегов настойка», «Черники обыкновенной сироп».

Разработаны методики анализа экспериментальных лекарственных препаратов по содержанию флавоноидов, в том числе антоцианов, с использованием методов ТСХ и спектрометрии в соответствии с принципами унификации, предъявляемыми к современному фармацевтическому анализу (Самы-лина И.А. и др., 1994; 2007).

Проведено изучение влияния водных и водно-спиртовых извлечений из плодов и побегов черники на экскреторную функцию почек на белых беспородных крысах. Результаты исследования показывают, что умеренным диуретическим действием обладают водные извлечения из побегов и препараты на основе свежих плодов черники. По показателям диуретической активности,

натрийуреза, калийуреза и креатининуреза через 24 ч действие экстракта из свежих плодов черники обыкновенной было сравнимо с действием гипоти-азида. Под влиянием водно-спиртовых извлечений из воздушно-сухих плодов и побегов черники происходит уменьшение диуреза по сравнению с контрольной группой.

Практическая значимость. Разработаны разделы «Микроскопия», «Количественное определение», усовершенствован раздел «Качественные реакции» (ТСХ-метод и метод спектроскопии), включенные в проект фармакопейной статьи на «Черники плоды», «Черники обыкновенной побеги», «Черники обыкновенной плоды свежие».

Предложены методики качественного и количественного анализа, определены показатели качества, которые нашли отражение в разработанных и принятых на рассмотрение ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» ФС «Черники плоды» и «Черники обыкновенной плоды свежие» и «Черники обыкновенной побеги» (№ 1016 от 22.01.13 г., вх. №1020 от 28.01.13 г., вх.) с целью включения в Государственную Фармакопею Российской Федерации XII издания.

Разработаны составы и способы получения, методы стандартизации препаратов из плодов и побегов черники. Получены Патент РФ на изобретение № 2484671 от 20.06.2013 г. «Сироп черники обыкновенной»; удостоверение на рационализаторское предложение № 219 от 21.09.2012 г. «Способ получения сиропа черники обыкновенной».

Результаты диссертационных исследований используются в учебных процессах на кафедрах фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, фармацевтической технологии, управления и экономики фармации, химии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России, ГБУ здравоохранения «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области», ЗАО «Самаралектравы».

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России (№ гос. регистрации 01200900568).

Положения, выдвигаемые на защиту.

1. Результаты сравнительных анатомо-гистологических исследований побегов черники обыкновенной и морфологически сходных, потенциально примесных видов.

2. Результаты сравнительного фитохимического исследования плодов и побегов черники обыкновенной и морфологически сходных видов.

3. Результаты исследований по разработке методик качественного анализа плодов и побегов черники обыкновенной.

4. Результаты исследований по разработке методик количественного определения суммы флавоноидов в плодах и побегах черники обыкновенной.

5. Данные по изучению стабильности антоцианов в зависимости от условий сушки сырья.

6. Результаты исследований по разработке способов получения лекарственных препаратов на основе плодов и побегов черники обыкновенной.

7. Данные по изучению показателей качества разработанных лекарственных препаратов («Черники обыкновенной сироп», «Черники обыкновенной пастилки», «Черники обыкновенной таблетки», «Черники побегов настойка»).

8. Результаты исследований диуретической активности экспериментальных препаратов на основе плодов и побегов черники обыкновенной.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на IV Всероссийском научно-практическом семинаре для молодых ученых с международным участием «Современные проблемы медицинской химии, направленный поиск новых лекарственных средств» (г. Волгоград, 2012), II Международном Конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (г. Москва, 2012); XV, XVI, XVII Всероссийских конгрессах «Экология и здоровье человека» (г. Самара, 2010; 2011; 2012); Первой Всероссийской научно-практической конференция молодых ученых «Проблемы разработки новых лекарственных средств» (г. Москва, 2013); в финале II Всероссийского конкурса УМНИК на СТАРТ 2011 (Самарская область, сентябрь 2011); конференциях дипломированных специалистов «Аспирантские чтения» (г. Самара, 2011; 2012; 2013).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 24 научной работе, из них 9 статей в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Личный вклад автора. Все экспериментальные результаты, приведенные в диссертации, получены самим автором. Автором в сравнительном аспекте выполнены исследования по изучению морфологических и анатомо-гистоло-гических особенностей строения различных органов черники обыкновенной. Из плодов черники обыкновенной выделены и идентифицированы 3 основных антоциана, из побегов черники - кверцетин-З-О-ксилопиранозид, кофейная кислота и даукостерин, р-ситостерин, из которых даукостерин выделен впервые, а кверцетин-З-О-ксилопиранозид выделен впервые из черники, произрастающей на территории Российской Федерации. Разработаны методики стандартизации плодов и побегов черники по содержанию флавоноидов. Изучено влияние водных и водно-спиртовых извлечений из плодов и побегов на экскреторную функцию почек. Разработаны составы и способы получения экспериментальных лекарственных препаратов: «Черники обык-

новенной сироп», «Черники обыкновенной пастилки», «Черники обыкновенной таблетки», «Черники побегов настойка». Разработаны методики их анализа, определены основные показатели качества. Автором разработаны проекты ФС «Черники плоды» и «Черники обыкновенной плоды свежие», «Черники обыкновенной побеги».

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 159 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 59 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), обсуждения результатов собственных экспериментальных исследований (главы 3-6), общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 135 источников, из которых 47 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, показаны научная новизна и практическая значимость полученных результатов, изложены положения, выносимые на защиту.

Глава 1 посвящена обзору современного состояния исследований черники обыкновенной, в котором систематизированы сведения по изучению химического состава, фармакологических свойств, применению в медицине, стандартизации сырья и препаратов на основе данного растения.

В главе 2 приведена характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики анатомо-морфологического, химического и физико-химического изучения лекарственного растительного сырья, индивидуальных соединений, методы оценки фармакологической активности и приготовления лекарственных препаратов.

В главах 3-6 экспериментальной части отражены результаты собственных исследований по фотохимическому изучению плодов и побегов черники обыкновенной, усовершенствованию методик стандартизации ЛРС и ЛП на его основе, разработке новых препаратов, оценке их качества, обоснованию целесообразности внедрения в медицинскую практику в качестве офтальмологических ЛС растительного происхождения.

В Приложения вынесены акты внедрения, проекты ФС на черники плоды воздушно-сухие и свежие, черники побега, патент РФ на изобретение, рационализаторское предложение.

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах, формулах, на рисунках, которые приведены в тексте диссертации.

1. Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили образцы сырья - плодов и побегов черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L., сем. Брусничные -Vacciniaceae), побегов брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L., сем. Брусничные - Vacciniaceae) и побегов толокнянки , заготовленные в период с 2012 по 2013 гг. на территории Пензенской области, Республики Марий Эл. На этапе проведения физико-химических методов анализа объектами исследования служили лабораторные образцы разрабатываемых препаратов на основе исследуемого сырья (таблетки, сиропы, пастилки, настойки), а также государственные стандартные образцы рутина, арбутина, цианидин-З-О-глюко-зида, кверцетина, даукостерина, ß-ситостерина, кофейной кислоты, кверце-тин-З-О-ксилопиранозида.

Исследование микропрепаратов плодов, листьев, стеблей растения осуществляли с помощью цифровых микроскопов «Motic DM-111» (возможность увеличения 4x10, 10x10,40x10,100x10) и цифрового стереоскопического микроскопа «Motic DM-39C-N9GO-A» (возможность увеличения х20, х40).

Изучение химического состава плодов и побегов проводили методом адсорбционной жидкостной колоночной хроматографии. При исследовании плодов элюирование проводили в градиентном режиме смесями хлороформа и этилового спирта, содержащего 0,1% хлороводородной кислоты (хлороформ, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%-ное содержание подкисленного этилового спирта в хлороформе). При исследовании побегов хроматогра-фическое разделение проводили на сорбенте силикагеле L40/100 с использованием в качестве элюентов хлороформа, спирто-хлороформных смесей в различных соотношениях, 95% спирта этилового. В качестве сорбентов использовании силикагель L40/100 (Чехия) и полиамид марки «Woelm» (Германия).

Для тонкослойного хроматографического разделения использовали пластинки «Силуфол УФ-254», «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ», «Сорбфил-ПТ-СХ-П-А-УФ». Спектры снимали на спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena) в кюветах с толщиной слоя 10 мм. "Н-ЯМР спектры регистрировали на спектрометре «Bruker AM 300». Масс-спектры электронного удара регистрировали на масс-спектрометре «Kratos MS-30» при энергии ионизирующих электронов 70 эВ и варьировании температуры ионного источника от 30°С до 250°С. ВЭЖХ-анализ проводили на жидкостном хроматографе Biotronic; хро-матографическая колонка Phenomenex Luna CI 8(2) (250 мм х 4,6 мм, 5 мкм) с

использованием смесей ацетонитрила и буферного раствора (0,01 М КН2Р04, подкисленный Н3Р04 до рН 3,00±0,01), расход подвижной фазы 0,6 мл/мин; детекция при длине волны 280 нм.

Исследование диуретической и салуретической активности проводили с использованием различных субстанций из плодов и побегов черники. В качестве препарата сравнения использовали гипотиазид в дозе 20 мг/кг.

2. Морфолого-анатомическое исследование черники обыкновенной

Проведено анатомо-гистологическое исследование побегов черники обыкновенной в сравнении с другими морфологически сходными видами ЛРС (листьями толокнянки и брусники). Выявлены диагностические особенности: характерная форма главной жилки на поперечном сечении, наличие одноклеточных толстостенны прямых волосков с грубой боровчатой поверхностью по жилкам с верхней стороны, булавовидных железок по обеим сторонам листовой пластинки, наличие выраженной кристаллоносной обкладки вдоль жилки с нижней стороны листа, характерным строением хлорофилло-носной паренхимы под эпидермисом побегов с отходящими от нее тяжами переплетащаюхся клеток (рис. 1-4).

В связи с тем, что большое значение для диагностики ЛРС имеет строение черешка, нами были изучены его диагностические признаки с позиции петиолярной анатомии (рис. 5):

1. Форма поперечного сечения: полулунная форма, слегка сплюснутая с адаксиальной стороны;

2. В паренхиме черешка локализован один закрытый коллатеральный пучок (центральная жилка), расположенные по центру, ближе к адаксиальной стороне, армированный с обеих сторон.

3. Колленхима представлена по всему периметру, неоднородна; образует более крупные участки в ребрах, более угловатых, чем у других изучаемых видов. Количество слоев в абаксиальной части - 1-3.

4. Основная паренхима представлена тонкостенными клетками от 10 до 80 мкм в диаметре. Имеются крупные клетки (идиобласты), содержащие призматические кристаллы и друзы оксалата кальция

5. Эпидермис опушен с адаксиальной стороны простыми одноклеточными волосками с грубой бородчатой поверхностью длиной 23-52 мкм.

Рис. 1. Эпидермис листа черники (х400).

Обозначения: А - булавовидные железки; Б - бородавчатые волоски. 1 - основание железки; 2 - бородавчатые волоски, 3 - двурядная ножка железки; 4 - многоклеточная головка железки; 5 - устьице.

Рис. 2. Кристаллоносная обкладка вдоль жилки (х400).

Обозначения: 1 - кристаллы оксалата кальция; 3 - устьице.

ЧШ1 . г; .

Рис. 3. Особенности строения стебля черники (х 400).

Обозначения: А - Эпидермис и субэпидермальные слои; Б - Первичная кора и древесина. 1 - кутикула; 2 - эпидермис; 3 - основная хлорофиллоносная паренхима; 4 - флоэма; 5 - кольцо механической ткани; б - древесина.

Рис. 4. Главная жилка (х100).

Обозначения: 1 - колленхима; 2 - механическая ткань; 3 - проводящий пучок; 4 - кутикула; 5 - нижний эпидермис; б - толстостенный волосок; 7 - верхний эпидермис; 8 - столбчатая паренхима; 9 - губчатая паренхима.

Рис. 5. Особенности строения черешка листа черники.

Обозначения: А - поперечный срез (хЮО); Б - поперечный срез (х400); - поперечный срез, окраска сернокислым анилином (х400); В - поперечный срез, окраска Суданом III (х400).

3. Фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья черники обыкновенной

С целью разработки методик качественного анализа методами тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии проведен фитохимический анализ побегов, свежих и воздушно-сухих плодов черники обыкновенной.

Определено, что оптимальное разделение антоцианов в условиях ТСХ-анализа происходит в системе н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода

(4:1:2). Имеются некоторые различия в профиле антоцианов свежих и воздушно-сухих плодов в связи с тем, что анто-цианы легко разрушаются под воздействием повышенных температур. Общим для извлечений из свежих и воздушно-сухих плодов является наличие циани-дин-З-О-глюкозида (Я ~ 0,35) и мальви-дин-З-О-глюкозида (Я, ~ 0,50) (рис. 6). Также различия наблюдаются в электронных спектрах поглощения извлечений из плодов: извлечение из свежих плодов черники имеет максимумы поглощения при 282±2 нм и 545±2 нм, соотношение (А282/ А546) примерно составляет 1,0:1,5; для воздушно-сухих плодов это соотношение изменяется в пользу коротковолнового максимума и составляет 1,0: 0,10-^0,15 (рис. 7).

Методом адсорбционной колоночной хроматаграфии в сочетании с перекристаллизацией и различными химиче-

Рис. 6. Схема ТСХ в системе н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2).

Обозначения: 1 - спиртовое извлечение из воздушно-сухих плодов черники; 2 - спиртовое извлечение из плодов черники свежих; 3 - мальвидин-З-О-глюкозид; 4- цианидин-З-О-глюкозид; 5 - дельфинидин-З-О-глюкозид.

Рис. 7. Спектры поглощения водно-спиртового извлечения из свежих плодов черники обыкновенной (1), воздушно-сухих плодов черники обыкновенной (2) и цианидин-З-О-глюкозида (3) в 95% этиловом спирте, содержащем 1 % HCl.

скими превращениями (ферментативный и кислотный гидролиз) из побегов и плодов черники обыкновенной выделено 6 индивидуальных соединений (табл. 1). Для установления структуры выделенных веществ использованы данные УФ-, "Н-ЯМР- и масс-спектров.

Таблица 1

Физико-химические константы и спектральные характеристики соединений, выделенных из плодов и побегов черники обыкновенной

1. Цианидин-З-О-глюкозид С21Н21О11 З-О-р-О-глюкопиранозил 3,5,7-тригидрокси-2-(3,4-дигидроксифенил) хроменилия он "YxVU ¿н масс-спектр (m/z): 287 (fyf" агликона); т.пл. 244-246°C; УФ-спектр: >.max 281 hm; 537 hm (1% HCl в 95% EtOH)

г. Мальвидин-З-О-глюкозид С23Н25О12 З-О-р-Э-глюкопиранозил 3,5,7-тригидрокси -2-(4-гидрокси- 3,5-диметоксифенил)хроменилия OCH, HO-¿^^sZ-OH масс-спектр (m/z): 331 (ii агликона); т.пл. 240-245°C; УФ-спектр-. /. max 281 hm; 544 hm (1% HCl в 95% EtOH)

3. Дельфинидин-З-О-глюкозид С21Н21О12 З-О-Р-Э-глюкопиранозил 3,5,7-тригидрокси-2-(3,4,5-тригидроксифенил) хроменилия YYW™ AH Ho^j-ri^-oH масс-спектр (m/z): 331 (M+ агликона); т.пл. 255-260°C; УФ-спектр: 281 нм; 551 hm (1% HCl в 95% EtOH)

Окончание таблицы 1

№ п/п Название Химическая формула Физико-химические характеристики

4. Кверцетин-З-О-ксилопиранозид СгоН^Ою З-О- ß-D-ксилопиранозид 2-(3,4-дигидроксифенил)-3,5,7-тригидрокси-4Н-хромен-4-она ОН......-Ху1 ОН О масс-спектр (m/z): 302 (М+ агликона); т.пл. 182-185°С (водный спирт); УФ-спектр: X imx 264 нм (плечо), 370 нм.

5. Кофейная кислота с9н8о4 (3-(3,4-дигидроксифенил)-2-пропенованя кислота Hoi^^Y0 ОН масс-спектр (т/г): 180; т.пл. 223-225°С; УФ-спектр. Я тах 327 нм (плечо)

6. Даукостерин Сз5НбоОб (З-О-глюкозид 17-(5-этил-6-метилгептан-2-ил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17- додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ола) f" масс-спектр (т/г): 414 (М+ агликона); т.пл. 315-318°С

7. ß-ситостерин С29Н50О (17-(5-этил-6-метилгептан-2- ил)-10,13 -диметил-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента|а~|фенантрен-3-ол) | й Т й но"О^1 масс-спектр (m/z): М+ 414; т.пл. 136-140°С

Для цианидина-З-О-глюкозида определены значения удельного показателя поглощения в 1% растворе хлороводородной кислоты в 95% этиловом спирте при аналитической длине волны 546 нм (100±4,3) и в 0,5% спиртовом растворе аммиака при аналитической длине волны 623 нм (250±3,6), которые использовались в дальнейших исследованиях при разработке методик количественного определения.

4. Совершенствование методов контроля качества плодов и побегов черники обыкновенной

В соответствии с ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» разработаны следующие методики контроля качества побегов, свежих и воздушно-сухих плодов черники обыкновенной, которые включены в проекты ФС на эти виды ЛРС.

4.1. Методики качественного анализа побегов черники обыкновенной.

Для оценки подлинности побегов также предложены методы ТСХ-анализа с использованием PCO рутина и электронной спектрометрии, которые включены в проект фармакопейной статьи «Черники обыкновенной побеги».

Условия ТСХ-анализа извлечений на 70% этиловом спирте из побегов черники обыкновенной: система этилаце-тат - безводная муравьиная кислота -вода (80:8:12), пластинку проявляютт раствором диазобензолсульфокислоты в насыщенном растворе натрия карбоната. Подлинность подтверждается наличием на пластинке пятен с Rs относительно пятна ГСО рутина 2,2-2,4 (доминирующий флавоноид - кверце-тин-З-О-Р-О-ксилопиранозид), допускается наличие других пятен (рис.9). Электронный спектр извлечения из побегов черники в области от 190 до 500 нм имеет характерные максимумы поглощения при 292±2 нм и 331±2 нм.

С целью определения возможности идентификации побегов черники при сравнении с другими близкородственными видами, проведен сравнительный фитохимический анализ побегов черники обыкновенной с морфологическими сходными видами ЛРС с использованием методов ТСХ и ВЭЖХ. Подтвержде-

Рис. 8. Схема ТСХ извлечений из листьев толокнянки, брусники и побегов черники на этиловом спирте 70% до и после фильтрования через слой алюминия оксида в системе хлороформ -спирт

этиловый 96% (6:4 об/об).

Обозначения:

1 - извлечение из листьев толокнянки до фильтрования;

2 - извлечение из листьев толокнянки после фильтрования;

3 - извлечение из листьев брусники до фильтрования;

4 - извлечение из листьев брусники после фильтрования;

5 - извлечение из побегов

черники до фильтрования;

6 - извлечение из побегов черники после фильтрования;

7 -стандартный образец арбутина.

но, что наличие пятна с относительно

пятна ГСО рутина 2,2-2,4 является диагностичным для изучаемого сырья.

Проведен ТСХ- и ВЭЖХ-анализ очищенных извлечений после фильтрования через слой алюминия оксида, необратимо связывающих полифеноль-ные соединения (рис. 8-10).

Следует отметить, что в описанных выше условиях для ВЭЖХ- и ТСХ-анализа арбутин в побегах черники обыкновенной не обнаруживается.

Рис. 9. ВЭЖХ-хроматограмма извлечения на 40% этиловом спирте из листьев толокнянки обыкновенной после фильтрования через слой алюминия оксида.

Рис. 10. ВЭЖХ-хроматограмма извлечения на 40% этиловом спирте из побегов черники обыкновенной после фильтрования через слой алюминия оксида.

4.2. Методики качественного анализа воздушно-сухих плодов черники обыкновенной.

Для идентификации сырья предложен метод ТСХ, который предусматривает получение настаиванием при комнатной температуре извлечения из сырья с использованием 95% этанола, содержащего 1% HCl, в соотношении «сырье - экстрагент» 1:5, хроматографирование в системе н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2) (пластинки «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ») и обнаружение пятен при видимом свете. На хроматограмме обнаруживаются розовые пятна с величиной Rf 0,47 и 0,51 (гликозиды мальвидина), фиолетового цвета с Rf 0,36 (цианидин-3-глюкозид) и пятна синего цвета с Rf 0,20 и 0,33 (гликозиды дельфинидина) (рис. 6).

Также для качественного анализа может быть использован метод спектроскопии. Электронный спектр водно-спиртового извлечение из плодов

черники в кислой среде имеет два выраженных максимума поглощения при 282±2 нм и 545±2 нм (рис. 7).

4.3. Методики качественного анализа воздушно-сухих плодов черники обыкновенной.

Для качественного анализа воздушно-сухого сырья также предлагаются методы тонкослойной хроматографии и спектроскопии.

Условиях хроматографического анализа аналогичны условиях при анализе свежих плодов. На хроматограмме обнаруживаются розовое пятно с величиной около 0,5 (гликозид мальвидина) и пятно фиолетового цвета с величиной около 0,35 (цианидин-3-глюкозид); допускается наличие других пятен (рис. 6). Электронный спектр водно-спиртового извлечения из воздушно-сухих плодов черники в кислой среде также имеет два выраженных максимума поглощения при 282±2 нм и 545±2 нм. Однако для воздушно-сухих плодов соотношение (А546/А282) изменяется в пользу коротковолнового максимума и составляет 1,0:0,10-^0,15.

4.4. Методика количественного определения суммы флавоноидов в побегах черники обыкновенной.

Проводят методом дифференциальной спектрометрии в присутствии ГСО рутина при аналитической длине волны 420 нм (рис. 12). Ошибка единичного определения суммы флавоноидов в побегах черники обыкновенной с доверительной вероятностью 95% составляет ±3,56% (табл. 2). В качестве нижнего предела содержания суммы флавоноидов рекомендовано значение «не менее 0,6%».

4.5. Методика количественного определения суммы антоцианов в свежих плодах черники обыкновенной.

Количественное определение проводят с использованием метода прямой спектрометрии в кислой среде при аналитической длине волны 546 нм. Оптимальные условиях для извлечения антоцианов: экстрагент - 1% раствор хлороводородной кислоты в 95% спирте этиловом, нагревание 30 мин на водяной бане, соотношение «сырье-экстрагент» - 1:50.

Ошибка единичного определения суммы антоцианов в пересчете на ци-анидин-З-О-глюкозида в плодах черники с доверительной вероятностью 95 % составляет 3,52 % (табл. 2). Нижний предел содержания суммы антоцианов рекомендован на уровне 3,5%.

4.6. Методика количественного определения суммы антоцианов в воздушно-сухих черники обыкновенной.

Для количественного определения также использовали метода прямой спектрофотометрии в кислой среде при аналитической длине волны 546 нм.

Оптимальные условиях для извлечения антоцианов: экстрагент - 1% раствор хлороводородной кислоты в 60% спирте этиловом, нагревание 60 мин на водяной бане, соотношение «сырье-экстрагент» - 1:50. Ошибка единичного определения суммы антоцианов в плодах черники с доверительной вероятностью 95% составляет 4,54% (табл. 2). По результатам анализа разных образцов нижний предел содержания предложен на уровне 3,0% в пересчете на абсолютно сухое сырье.

4.7. Методика определения суммы антоцианов в плодах черники обыкновенной (аммиачный метод)

Была исследована также возможность определения антоцианов дифференциальным методом при смещении рН в сторону щелочной реакции среды (рис. 13). Щелочную среду создавали 0,5% раствором аммиака в 95% спирте этиловом. Расчеты проводили с использованием удельного показателя поглощения цианидина-З-О-глюкозида. Содержание антоцианов в свежих плодах черники составило 0,60±0,02%, в воздушно-сухих 0,325±0,009%. Метрологические характеристики представлены в таблице 2.

Рис. 11. Электронные спектры поглощения водно-спиртового извлечения из побегов черники (1) и комплекса извлечения с раствором алюминия хлорида (2).

Д"1111111 15" Ш 1.1 им

Рис. 12. Электронные спектры поглощения исходного извлечения из воздушно-сухих плодов черники (1) и в 0,5% растворе аммиака в 95% спирте этиловом (2).

Таблица 2

Метрологические характеристики спектрофотометрических методик количественного определения, суммы БАС в плодах и побегах черники обыкновенной

Вид сырья, группы БАС X Б Р,% ДХ Е, %

Свежие плоды (антоцианы) 6 4,15 0,0580 95 2,45 0,14 ± 3,52

Воздушно-сухие плоды (антоцианы) 6 4,15 0,0767 95 2,45 0,18 ±4,54

Окончание таблицы 2

Вид сырья, группы БАС { X 5 Р,% 1(Р.О ДХ Е, %

Побеги (флавоноиды) 6 0,73 0,027645 95 2,45 0,026 ±3,56

Свежие плоды (антоцианы, аммиачный метод) 6 0,60 0,02160 95 2,45 0,02 ±3,33

Воздушно-сухие плоды (аммиачный метод) 6 0,325 0,00972 95 2,45 0,009 ±2,77

Разработанные методики качественного и количественного определения суммы флавоноидов в плодах и побегах черники обыкновенной включены в проекты ФС «Черники обыкновенной плоды свежие», «Черники плоды» и «Черники обыкновенной побеги», принятые на рассмотрение ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения».

5. Научное обоснование целесообразности разработки и стандартизации импортзамещающих лекарственных препаратов на основе плодов и побегов черники обыкновенной

В результате обзора имеющихся данных по состоянию рынка показана целесообразность разработки отечественных препаратов для улучшения функционального состояния сетчатки глаза на основании антоцианов плодов черники обыкновенной.

В результате предварительных исследований были подобраны оптимальные условия упаривания сока плодов черники с целью максимального сохранения антоцианов (под вакуумом при температуре + 60+2 °С).

В связи с тем, что основными действующими соединениями побегов черники обыкновенной являются флавоноиды, были подобраны условия для получения настойки (70% этиловый спирт).

Впервые изучено влияние полученных экспериментальных препаратов из плодов и побегов черники на экскреторную функцию почек. Результаты исследований показывают, что умеренным диуретическим действием обладают водные извлечения из побегов черники и препараты на основе свежих плодов черники. Возрастание диуреза, натрийуреза, калийуреза и креатининуреза через 24 ч после введения экстракта из свежих плодов черники обыкновенной было сопоставимо с действием гипотиазида в аналогичных условиях. Введение водно-спиртовых извлечений из воздушно-сухих плодов и побегов черники способствовало уменьшению диуреза в опытной группе по сравнению с контрольной. На наш взгляд, такое различие в действии экспериментальных препаратов обусловлено высоким содержанием дубильных веществ.

С учетом условий, необходимых для стабильности антоцианов, предложена схема получения таблеток из упаренного сока плодов черники прямым прессованием с использованием в качестве наполнителя микрокристаллической целлюлозы с добавлением аэросила. Предложен оригинальный состав сиропа на основе упаренного сока плодов черники с использованием в качестве корригентов сахарозы, фруктозы или сорбита в зависимости от сопутствующих заболеваний. Разработана схема получения пастилок из сока плодов черники с использованием агара.

Для стандартизации разработанных препаратов из плодов черники использован метод прямой спектрофотометрии при аналитической длине волны 546 нм в пересчете на цианидин-З-О-глюкозид. Нижний предел содержания антоцианов в одной таблетке 0,3 г - 18,0±0,2 мг; в сиропе - не менее 0,3%; в пастилках 1,7 г-не менее 35,0 мг. Препараты из побегов черники анализировали на содержание флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии с алюминия хлоридом в пересчете на рутин при длине волны 420 нм. Рекомендуемый нижний предел содержания флавоноидов в настойке - не менее 0,05% в пересчете на рутин.

1. В результате анатомо-морфологических исследований изучены листья, стебли, плоды черники обыкновенной. Получены микрофотографии диагностических признаков, которые включены в проекты фармакопейных статей «Черники плоды», «Черники плоды свежие» и «Черники обыкновенной побеги».

2. Впервые изучено анатомическое строение черешка листа черники обыкновенной, которое может иметь важное значение при морфоло-го-анатомической диагностике сырья.

3. В результате фитохимического исследования из побегов черники выделены и идентифицированы методами "Н-ЯМР, масс-спектрометрии: кверцетин-З-О-ксилопиранозид (З-О-ксилопиранозид 3,5,7,3",4"-пен-тагидроксифлавона), кофейная кислота и даукостерин, (5-ситостерин, из которых даукостерин впервые обнаружен в побегах черники, а кверцетин-З-О-ксилопиранозид впервые выделен из черники обыкновенной, произрастающей на территории Российской Федерации.

4. Из плодов черники обыкновенной выделены и идентифицированы три соединения антоциановой природы: З-О-глюкозиды цианиди-на, мальвидина и дельфинидина. Изучены их спектральные характеристики и впервые определен удельный показатель поглощения цианидина-З-О-глюкозида в 1% растворе хлороводородной кислоты в 95% спирте этиловом и в 0,5% растворе аммиака в 95% спирте этиловом.

5. Разработаны методики качественного анализа водно-спиртовых извлечений из плодов черники обыкновенной методом тонкослойной хроматографии в системе н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2) и методом электронной спектрометрии по наличию максимумов поглощения при 281 ±2 и 546±2 нм.

6. Разработаны методики качественного анализа побегов черники обыкновенной методом тонкослойной хроматографии в системе этилаце-тат - безводная муравьиная кислота - вода (80:8:12) и методом электронной спектрометрии по наличию максимумов поглощения при 291+2 и 331 ±2 нм.

7. Разработана методика количественного определения суммы антоци-анов в свежих плодах черники обыкновенной методом прямой спектрометрии при аналитической длине волны 546 нм в пересчете на цианидин-З-О-глюкозид; а также методика количественного определения флавоноидов в побегах черники методом дифференциальной спектрометрии с алюминия хлоридом в пересчете на рутин при аналитической длине волны 420 нм.

8. Проведены исследования по возможности количественного определения антоцианов дифференциальной спектрометрией в щелочной среде (0,5% раствор аммиака в 95% спирте этиловом) на основании их способности к таутомерным превращениям.

9. В качестве нижнего предела содержания суммы антоцианов в сырье «Черники плоды» предложено значение «не менее 3,0%», в сырье «Черники плоды свежие» - «не менее 3,5%»; для сырья «Черники обыкновенной побеги» нижний предел содержания суммы флавоноидов предложен «не менее 0,6%».

10. На основании химико-технологических исследования разработаны состав и технология получения следующих препаратов «Черники сироп», «Черники таблетки» и «Черники пастилки», а также изучены показатели их качества.

11. В ходе фармакологических исследований было установлено, что настой и сок черники в дозе 50 мг/кг стимулируют диурез, натрийурез и креатининурез за 4 часа эксперимента, а экстракт плодов черники на 70% этаноле в дозе 50 мг/кг увеличивает почечную экскрецию воды, натрия и креатинина за 4 и 24 часа эксперимента.

12. Разработаны проекты ФС «Черники плоды», «Черники обыкновенной плоды свежие» и «Черники обыкновенной побеги», которые направлены в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» с целью включения в Государственную Фармакопею Российской Федерации XII издания.

1. Куркин, В.А. Качественный и количественный анализ антоцианов плодов черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова II Фармация. - 2012. -№2.-С. 10-13.

2. Куркин, В.А. Количественное определение суммы флавоноидов в побегах черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Химико-фармацевтический журнал. - 2013. - Т. 47, №4. - С. 34-37.

3. Куркин, В.А. Новые подходы в области стандартизации плодов черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Известия Самарского научного центра Российской Академии наук. - 2011. - Т. 13 (39), № 1 (8). - С.2010-2015.

4. Куркин, В.А. Новые подходы к комплексному использованию плодов и побегов черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Известия Самарского научного центра Российской Академии наук. - 2012. - Т. 14, № 5 (3). - С. 757-761.

5. Куркин, В.А. Новые подходы к стандартизации плодов черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Химия растительного сырья. - 2012. -№4.- С. 167-173.

6. Рязанова, Т.К. Фармакогностическое исследование плодов и побегов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // Фундаментальные исследования. -2013. - № 8 (часть 5). - С. 1136-1140.

7. Рязанова, Т.К. Оптимизация температурных условий высушивания плодов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // Аспирантский вестник Поволжья. - 2013. - № 1. - С. 210-213.

8. Куркин, В.А. Разработка методики определения антоцианов в лекарственном растительном сырье / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова, А.В. Куркина, А.В. Егорова // Фармация. - 2014. - № 4. - С. 17-20.

9. Ryazanova, Т.К. Quantitative determination of total flavonoids in bilberry shoots / V.A. Kurkin, Т.К. Ryazanova // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2013. -Vol. 47 Issue 4 - P. 213.

10. Рязанова, Т.К. Исследование по созданию лекарственных препаратов из сока плодов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // Аспирантские чте-ния-2013. - Самара, 2013. - С. 195-198.

11. Рязанова, Т.К. Сравнительное фитохимическое исследование плодов и побегов черники обыкновенной и разработка подходов к их стандартизации / Т.К. Рязанова // Сборник тезисов Первой Всероссийской научно-практи-

ческой конференции молодых ученых: Проблемы разработки новых лекарственных средств. - Москва, 3-5 июня 2013 г. - С. 106.

12. Рязанова, Т.К. Актуальные вопросы стандартизации надземных органов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // Сборник тезисов «Всероссийская молодежная научная школа «Биоматериалы и нанобиоматериалы: Актуальные проблемы и вопросы безопасности». - Казань, 2012. - С. 47.

13. Рязанова, Т.К. Вопросы стандартизации плодов и побегов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // Тезисы IV Всероссийского научно-практического семинара молодых ученых с международным участием «Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных средств». - Волгоград, 2012. - С. 62-63.

14. Рязанова, Т.К. Вопросы стандартизации плодов черники обыкновенной и препаратов на их основе / Т.К. Рязанова II Материалы Всеукраинской научно-практической конференции «Актуальные вопросы создания новых лекарственных средств». - Харьков, 2012. - С. 108.

15. Рязанова, Т.К. Исследование по разработке и стандартизации лекарственных препаратов на основе лекарственного растительного сырья, содержащего антоцианы / Т.К. Рязанова// Материалы докладов конкурса программы УМ.Н.И.К. - Самара, 2010. - С.36-38.

16. Рязанова, Т.К. Исследование по разработке лекарственных препаратов на основе плодов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // V Всероссийская (79-я Итоговая) студенческая научная конференция: сборник материалов - Самара, 2011. - С. 184.

17. Рязанова, Т.К. Фармакогностическое исследование побегов черники обыкновенной / Т.К. Рязанова // Аспирантские чтения-2012. - Самара, 2012. -С. 220-223.

18. Куркин, В.А. Перспективы создания импортозамещающих нейротроп-ных, иммуномодулирующих, антиоксидантных и гепатопротекторных фитопрепаратов / В.А. Куркин, A.B. Дубищев, Е.В. Авдеева, О.Л. Кулагин, В.Б. Браславский, Т.К. Рязанова и др.// Материалы научных трудов научно-практической конференции «Средства и методы традиционной китайской медицины в России»,- Москва, 2011. - С. 23-24.

19. Куркин, В.А. Исследование по стандартизации побегов черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Сборник научных материалов II Международного конгресса «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации». - Москва, 2012. - С. 257-261.

20. Куркин, В.А. Исследование фенольных соединений побегов черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Материалы VIII Международного

Симпозиума «Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты». Москва, 2-5 октября 2012 г. - С. 641-645.

21. Петрухина, И.К. Изучение факторов, влияющих на выбор препаратов, используемых для улучшения функционального состояния сетчатки глаза / И.К. Петрухина, Л.В. Логинова, Т.К. Рязанова // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы XI Международной конференции, 17-18 мая 2013 г., Минск. - Минск, 2013. - С. 89-91.

22. Петрухина, И.К. Результаты маркетинговых исследований номенклатуры лекарственных средств, применяемых при заболевания глаз / И.К. Петрухина, Л.В. Логинова, Т.К. Рязанова // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы X Международной конференции, 6-7 апреля 2012 г., Минск. - Минск, 2012. - С. 435-437.

23. Рязанова, Т.К. Фитохимическое исследование плодов черники обыкновенной и разработка лекарственных препаратов на их основе / Т.К. Рязанова // Аспирантские чтения-2011. - Самара, 2011. - С. 327-331.

24. Патент 2484671РФ.МПК А23Ы/30, А231Л/212,А61К36/45 Сироп черники обыкновенной / Куркин В.А., Рязанова Т.К. - Дата поступления заявки 15.11.2011. - Опубл. 20.06.2013.

1

Проведено фармакогностическое исследование воздушно-сухих побегов, свежих и воздушно-сухих плодов черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.). Методом жидкостной колоночной хроматографии выделены биологически активные вещества плодов (цианидин-3-глюкозид) и побегов (кверцетин-3-ксилопиранозид). С целью подтверждения подлинности сырья были разработаны методики качественного анализа с использованием методов тонкослойной хроматографии и спектроскопии в УФ- и видимой области спектра. С учетом физико-химических характеристик выделенных соединений были разработаны методики количественного определения суммарного содержания антоцианов в плодах (в пересчете на цианидин-3-глюкозид) и флавоноидов в побегах (в пересчете на рутин). Ошибка единичного определения суммы антоцианов в плодах черники воздушно-сухих с доверительной вероятностью 95 % составляет ± 3,52 %, в свежих плодах ± 4,54 %. Ошибка единичного определения суммы флавоноидов в побегах черники с доверительной вероятностью 95 % составляет ± 3,56 %. Разработанные методики включены в проекты фармакопейных статей на плоды свежие и воздушно-сухие и побеги черники обыкновенной.

черника обыкновенная

Vaccinium myrtillus L.

антоцианы

флавоноиды

стандартизация

цианидин-3-О-глюкозид

кверцетин-3-О-β-D-ксилопиранозид

1. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1990. – 400 с.

2. Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание по состоянию на 1 апреля 2009 года: в 2-х т. Т.1. – М.: Изд-во «Медицинский совет», 2009. – 1359 с.

3. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). – 2-е изд., перераб. и доп. – Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2007. – 1239 с.

4. О государственных стандартах качества лекарственных средств: приказ Минздрава РФ от 01.11.2001 N 388 (вместе с «ОСТ 91500.05.001-00. Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения») [Электронный ресурс] // справ.-правовая система «КонсультантПлюс». – URL: http://base.consultant.ru/cons/cgi/online.cgi?req = doc;base = LAW;n = 34097 (дата обращения: 30.04.13 г.).

5. Черники обыкновенной побеги: ФСП 42-8635-07 (ОАО «Красногорсклексредства»).

6. Шилова И.В. Химический состав и ноотропная активность растений Сибири / И.В. Шилова, Н.И. Суслов, И.А. Самылина. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 2010. – 236 с.

7. European Pharmacopoeia. 6-th Ed. / Rockville: United States Pharmacopoeial Convention. Inc. – 2008. – P. 738–739.

8. Anthocyanins in medicine / E. Kowalczyk, P. Krzesiñski, M. Kura, B. Szmigiel, J.Blaszczyk // Pol. J. Pharmacol. – 2003. – Vol. 55. – P. 699–702.

9. Zushang Su. Anthocyanins and Flavonoids of Vaccinium L. // Pharmaceutical Crops. – 2012. – Vol. 3. – Р. 7–37.

Черника обыкновенная (Vaccinium myrtillus L.) является одним из ценных растительных источников фенольных соединений, обладающих фармакологической активностью . Фармакопейным сырьем являются плоды воздушно-сухие и побеги . В настоящее время широкое применение препаратов на основе плодов черники при различных заболеваниях глаз связывают с содержащимися в них антоцианами, подклассом флавоноидов . Побеги черники входят в состав противодиабетического сбора «Арфазетин-Э» . Однако вопросы стандартизации плодов и побегов черники по-прежнему остаются нерешенным. Применяемая на территории Российской Федерации фармакопейная статья на воздушно-сухие плоды черники обыкновенной содержит далеко не все показатели качества, требуемые в соответствии с ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» к нормативным документам на лекарственное растительное сырье (отсутствует раздел «Микроскопия», не предусмотрено количественное определение действующих веществ, качественный анализ представлен пробирочными реакциями) . На наш взгляд, стандартизацию плодов черники целесообразно проводить по содержанию антоцианов как наиболее уязвимой группе биологически активных соединений (БАС). Следует отметить, что в Европейской фармакопее, кроме воздушно-сухих, регламентируется качество свежих плодов, которые являются более перспективным источником антоцианов . Стандартизация побегов черники в настоящее время осуществляется по содержанию дубильных веществ . Однако, с нашей точки зрения, гипогликемическое, противовоспалительное, капилляроукрепляющее, кардиопротективное, антиагрегантное действие, а также выявленная недавно ноотропная активность побегов также могут быть обусловлены другой группой БАС - флавоноидами .

В связи с этим целью настоящего исследования было проведение фармакогностического исследования побегов и плодов черники обыкновенной и разработка методик их анализа.

Материалы и методы исследования

В исследовании использованы тонкослойная хроматография (ТСХ), адсорбционная жидкостная колоночная хроматография и спектроскопические методы. При использовании метода ТСХ разделение веществ проводили на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ». Регистрацию спектров проводили с помощью спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena) в диапазоне длин волн 190-700 нм.

Объектом исследования являлись побеги черники обыкновенной, заготовленные в Пензенской области и Республике Марий Эл в 2010-2011 гг., а также плоды черники обыкновенной свежезамороженные (ЗАО «Хладокомбинат западный», Московская область, г. Одинцово, ТУ 9165-002-47569210-00); образцы плодов из разных регионов РФ (Алтайский край, Республика Татарстан); плоды черники воздушно-сухие (ООО ПКФ «Фитофарм» (г. Анапа, Краснодарский край), ЗАО «Иван-Чай» (г. Москва).

Результаты исследования и их обсуждение

На первоначальном этапе нами была проведена работа по выделению действующих веществ из плодов и побегов черники обыкновенной с использованием метода адсорбционной жидкостной колоночной хроматографии.

При фитохимическом исследовании плодов на сорбент (силикагель L 40/100) наносили и высушивали на воздухе предварительно упаренный под вакуумом сок свежих плодов черники. Полученный порошок наносили на слой силикагеля, сформированный в хлороформе. Хроматографическую колонку элюировали хлороформом и смесью хлороформ-этанол (0,1 % НСl) в различных соотношениях (97:1; 97:2; 97:3; 95:5; 93:7; 90:10; 85:15; 80:20; 70:30, 60:40, 50:50; 40:60; 20:80, этанол). Контроль за ходом элюирования осуществляли с помощью ТСХ-анализа в системе н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2).

В результате нами был выделен ряд фракций, содержащих вещества антоциановой природы. После их очистки с помощью рехроматографии на полиамиде (Woelm) с использованием смеси хлороформа и этанола (0,01 % НСl) в градиентном режиме были выделены 3 доминирующих антоциана с Rf около 0,51; 0,36 и 0,20 в системе н-бутанол - ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2) (рис. 1). Изучение электронных спектров показало, что кривые поглощения выделенных антоцианов имеют характерные максимумы при 281 ± 2 нм и в видимой области в интервале 538 ± 2 - 551 ± 2 нм. Для вещества с Rf 0,51 максимум поглощения соответствовал 538 ± 2 нм; для вещества с Rf 0,36 - 546 ± 2 нм; веществу с Rf 0,20 соответствовала длина волны при максимуме поглощения 551 ± 2 нм. На основании данных УФ- и 1Н-ЯМР-спектров соединение с Rf около 0,36 идентифицировано как цианидин-3-О-глюкозид.

Из побегов черники обыкновенной получали извлечение методом дробной модифицированной мацерации на 70 % этиловом спирте. Полученное извлечение упаривали под вакуумом и наносили на сорбент силикагель L 40/100. Хроматографирование проводили так же, как описано для плодов, но без добавления хлороводородной кислоты. Элюаты делили на фракции примерно равного объема (200 мл), которые затем упаривали под вакуумом. В дальнейшем для выделения индивидуальных веществ отдельные фракции рехроматографировали на полиамиде (Woelm) и силикагеле L 40/100. Дополнительную очистку проводили перекристаллизацией из спирта и воды. Ход хроматографического разделения и очистки веществ контролировали методом ТСХ в системе н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2) и этилацетат - безводная муравьиная кислота - вода (80:8:12) (рис. 2). Пятна на пластинке детектировали по свечению в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм и по окраске после обработки хроматограмм щелочным раствором диазобензолсульфокислоты.

Выделенные вещества были исследованы с помощью УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, различных химических превращений, ТСХ. Кислотный гидролиз выделенного доминирующего флавоноида проводили путем нагревания вещества с 10 % раствором кислоты хлороводородной на кипящей водяной бане в течение 2,5 ч. Ферментативный гидролиз проводили с использованием эмульсина при температуре 37 ± 2 °С. В результате были выделены вещества, которые предварительно идентифицированы как кверцетин-3-О-β-D-ксилопиранозид, кофейная кислота, даукостерин, упоминаемые в литературных источниках .

На наш взгляд, целесообразным для идентификации и подтверждения доброкачественности сырья является спектроскопический метод.

Извлечение из плодов черники в диапазоне длин волн 190-700 нм имеет максимумы поглощения в видимой (546 ± 2 нм) и УФ-области спектра (281 ± 2 нм). Соотношение оптических плотностей в УФ-области и в видимой области спектра (А282/А546) является показателем сохранности антоцианов в сырье. Для антоцианов и извлечения из свежих плодов это соотношение составляет примерно 1:1,5-1,8 (рис. 3). Для воздушно-сухих плодов это соотношение изменяется в пользу коротковолнового максимума и составляет 1,0:0,10-0,15 (рис. 3). Такое различие, вероятно, обусловлено изменением химического состава плодов черники в результате высушивания в пользу полифенольных соединений.

Рис. 1. ТСХ-анализ плодов: система растворителей н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2). Обозначения:1 - спиртовое извлечение из воздушно-сухих плодов черники;2 - спиртовое извлечение из плодов черники свежих; 3 - мальвидин-3-О-глюкозид; 4 - цианидин-3-О-глюкозид;5 - дельфинидин-3-О-глюкозид

Рис. 2. ТСХ-анализ побегов: система растворителей этилацетат - безводная муравьиная кислота - вода (80:8:12). Обозначения: 1 - раствор РСО рутина; 2 - извлечение из побегов черники обыкновенной на 70 % этиловом спирте; 3 - раствор кверцетин-3-О-β-D-ксилопиранозида; 4 - раствор кофейной кислоты

Рис. 3. Спектры поглощения водно-спиртового извлечения из свежих плодов черники обыкновенной (1), воздушно-сухих плодов черники обыкновенной (2) и цианидин-3-О-глюкозида (3) в 95 % этиловом спирте, содержащем 1 % НСl

Извлечение из побегов черники имеет максимумы поглощения при длинах волн 292 ± 2 и 331 ± 2 нм. Вклад в кривую поглощения могут вносить кверцетин-3-О-β-D-ксилопиранозид, кофейная кислота и другие присутствующие в сырье фенольные соединения (рис. 4, 5).

Для подтверждения доброкачественности лекарственного растительного сырья плодов и побегов черники обыкновенной нами были разработаны методики количественного определения действующих соединений в сырье.

В связи с тем, что антоцианы являются более биологически активной и в то же время более лабильной группой соединений, нами предлагается стандартизировать и свежие и воздушно-сухие плоды по содержанию антоцианов (в отличие от требований Европейской фармакопеи). Для целей стандартизации был определен удельный показатель поглощения выделенного цианидин-3-О-глюкозида в 1 % растворе хлороводородной кислоты в 95 % этиловом спирте при аналитической длине волны 546 нм, который составил 100 ± 4,3. Полученное значение удельного показателя поглощения было использовано при разработке методики количественного определения антоцианов в плодах черники. Сравнилась экстракционная способность спиртов различных концентраций, влияние рН, температуры, соотношения «сырье - экстрагент» и времени экстрагирования. Определено, что наибольший выход антоцианов из быстрозамороженных плодов черники наблюдается при использовании в качестве экстрагента 95 % этилового спирта, содержащего 1 % раствора хлороводородной кислоты, соотношение «сырье - экстрагент» - 1:50; время экстракции - 30 мин на кипящей водяной бане. Для воздушно-сухих плодов черники обыкновенной соответственно: экстрагент - 60 %-й этиловый спирт, содержащий 1 % хлороводородной кислоты; соотношение «сырье - экстрагент» - 1:50; время экстракции на водяной бане при температуре 85-90 °С в течение 90 мин. Содержание суммы антоцианов в исследуемых образцах свежих плодов составляло 3,80-4,10 %, для образцов воздушно-сухих плодов этот показатель варьировался от 4,04 до 4,79 %.

Рис. 4. Спектры поглощения извлеченияна 70 % спирте из побегов черники обыкновенной (1), раствора кверцетин-3-О-β-D-ксилопиранозида (2)

Рис. 5. Спектры поглощения извлечения на 70 % спирте из побегов черники обыкновенной (1) и раствора кофейной кислоты (2)

Побеги мы предлагаем анализировать по содержанию флавоноидов, которые также могут вносить существенный вклад в фармакологическое действие препаратов и более подвержены различным факторам окружающей среды в отличие от анализируемой в настоящее время группы дубильных веществ. При разработке методики количественного определения флавоноидов в побегах в связи со схожестью строения и химических свойств доминирующего флавоноида и рутина расчет содержания БАС проводили в пересчете на рутин. Анализ проводили методом дифференциальной спектрофотометрии с алюминия хлоридом при аналитической длине волны 420 нм, соответствующей максимальной разнице оптических плотностей извлечения после добавления алюминия хлорида и исходного извлечения. В ходе исследования было установлено, что оптимальным экстрагентом является 70 % этиловый спирт, который позволяет наиболее полно извлечь флавоноиды из сырья по сравнению с другими концентрациями; оптимальным является соотношение «сырье - экстрагент» - 1:50; время экстракции - 30 мин после закипания экстрагента на кипящей водяной бане. Содержание флавоноидов и исследуемых образцах варьировалось от 0,62 до 1,62 %.

Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного определения суммы антоцианов в плодах черники воздушно-сухих с доверительной вероятностью 95 % составляет ± 3,52 %; в свежих плодах ± 4,54 %. Ошибка единичного определения суммы флавоноидов в побегах черники с доверительной вероятностью 95 % составляет ± 3,56 %.

Таким образом, в ходе исследования:

Проведено фитохимическое исследование надземных органов черники обыкновенной.

Разработаны методики качественного анализа действующих веществ в используемых видах фармакопейного сырья черники обыкновенной (плодах и побегах) (методы тонкослойной хроматографии и электронной спектроскопии).

Разработаны методики количественного анализа действующих веществ в плодах и побегах.

Разработанные методики качественного и количественного анализа включены в проекты фармакопейных статей на исследуемые виды сырья.

Рецензенты:

Шаталаев И.Ф., д.б.н., профессор, заведующий кафедрой химии фармацевтического факультета, ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Самара;

Правдивцева О.Е., д.фарм.н., доцент кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Самара.

Работа поступила в редакцию 11.07.2013.

Библиографическая ссылка

Рязанова Т.К. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПЛОДОВ И ПОБЕГОВ ЧЕРНИКИ ОБЫКНОВЕННОЙ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 8-5. – С. 1136-1140;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32097 (дата обращения: 15.07.2019). Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»

Евгений Шумарин

Время на чтение: 7 минут

А А

Эта ягода - чуть ли на самый популярный ингредиент многочисленных здоровых коктейлей, смузи и каш. Немудрено - черника богата антиоксидантами, ее употребление способствует укреплению здоровья, сохранению остроты зрения и повышению восстановительных способностей организма. Чернику выращивают в искусственных условиях, но самой полезной считается дикая лесная ягода. Правда, в современных условиях это не всегда так. Лучшая черника - выращенная без применения пестицидов, она существенно выигрывает в пользе у ягоды, собранной в неблагополучных экологически регионах. Крупным поставщиком этой ягоды является Финляндия.

Сорта и виды культурной черники

Черника тоже является объектом внимания селекционеров. И это «обратные» усилия. Если большинство ягод пытаются сделать морозоустойчивыми, то чернику - пригодной для выращивания на юге. К видам черники относятся «северные» и «южные» сорта.

В США есть простейшая классификация этих ягод:

• Сорта «хайбуш» — высокие кусты - плодоносят много, используются не только для выращивания ягод, но и для ландшафтного дизайна. Любители умудряются делать из них целые парковые фигуры.
• И сорта «лоубуш» . Поставщики самых сладких ягод, используемые преимущественно в агрономических целях.

В нашей стране наибольшей популярностью пользуются сорта Дьюк и Херберт. Они достаточно универсальны, относительно неприхотливы и урожайны.

Состав и энергетическая ценность черники

100 г черники дают нам порядка 44 ккал:

• 7, 6 г углеводов.
• 1 г белка.
• 0, 6 г жиров.

Витамины в составе черники:

• Витамин PP 0,3 мг.
• Витамин B1 (тиамин) 0,01 мг.
• Витамин B2 (рибофлавин) 0,02 мг.
• Витамин C 10 мг.
• Витамин E 1,4 мг.
• Витамин PP (Ниациновый эквивалент) 0,4 мг.

Минералы в составе черники:

• Кальций 16 мг.
• Магний 6 мг.
• Натрий 6 мг.
• Калий 51 мг.
• Фосфор 13 мг.
• Железо 0,7 мг.

Польза и вред черники

Полезные свойства черники

1. В народной медицине черника используется для восстановления зрения. Да, ее витаминно-минеральный состав позволяет говорить о том, что она способствует восстановлению сетчатки, повышению тонуса мышц, и профилактике авитаминоза. Однако врачи утверждают, что дегенеративные состояния и заболевания лечить черникой бесполезно.
2. Рынок перенасыщен БАДами на основе черники и лютеина, которые по сути своей ничем не лучше обычных витаминно-минеральных комплексов. Однако для общего укрепления и профилактики ягода все равно более полезна, чем синтетические витамины. Причина - хорошая усвояемость полезных веществ из натуральных продуктов.
3. Черника богата антиоксидантами. Они позволяют предотвратить раннее старение, ускоряют процессы восстановления после физических нагрузок и помогают нам дольше оставаться активными. Есть исследования, подтверждающие, что антиоксиданты черники обладают мощным потенциалом в вопросах профилактики воспалительных процессов, аутоимунных заболеваний и даже отклонений в протекании метаболизма. Некоторые источники утверждают, что диета, богатая антиоксидантами - лучший способ предотвратить ожирение, диабет и метаболический синдром.
4. Ягоды черешни обладают мягким вяжущим и антибактериальным действием. Источники по народной медицине называют их хорошим средством при различных заболеваниях от пищевых отравлений до ОРВИ. На самом деле, черника может оказывать позитивное действие на иммунную систему человека за счет богатого витаминно-минерального состава. Ягоды рекомендуют для профилактики.
5. Диетологи советуют включать чернику в рацион лиц старшего возраста, так как она легко усваивается, отдает все необходимые витамины, и содержит достаточно много клетчатки, чтобы предотвратить нарушения пищеварения.
6. Из-за клетчатки ягоды полезны абсолютно всем. Они способствуют оздоровлению кишечной флоры, их употребление - залог полного усвоения витаминов и минеральных веществ и из других продуктов тоже.
7. На основе черники выпускают косметику и БАДы с общеукрепляющим и витаминизирующим действием. Черника есть в составе шампуней, мыла, кремов, лосьонов и даже различных скрабов для лица и тела.
8. Черничный лист входит в состав органических чаев и сборов. Он обладает мягким мочегонным действием. Отеки уходят хорошо, а вот водно-солевой баланс не нарушается.
9. Черничный лист считается полезным и для профилактики заболеваний суставов, воспалительных процессов. Его заваривают и при простуде из-за мягкого обезболивающего и спазмолитического эффекта.

Вред черники

• Черника может вызвать аллергическую реакцию. Выражается она обычно агрессивно, сыпью дело не ограничивается, могут возникать отеки носоглотку и другие неприятные явления. Существует анализ крови, позволяющий точно определить, есть ли реакция на ягод, или нет.
• Чернику стоит употреблять ограничено при обострениях заболеваний ЖКТ, а также в период приема высокодозированных витаминов по медицинским показаниям.

Черника в рационе беременных, кормящих матерей, детей, диабетиков: рекомендации диетологов

Беременным черника поможет избавиться от отеков, послужит хорошей профилактикой повышения давления, и будет способствовать нормальной работе кишечника. Натуральные источники витаминов и минералов предпочтительны во время беременности.

Количество черники в рационе - индивидуальный показатель. Продукт можно есть, если нет аллергической реакции у ребенка, и следует ограничить, если она есть.

В рацион детей чернику вводят уже после того, как организм ребенка привык к не ярко окрашенным фруктам и овощам, но в целом умеренные порции ягоды полезны.

Диабетики могут есть чернику, учитывая ее в общем количестве потребляемых углеводов.

Для она полезна, так как дает дополнительную подпитку витаминами и минералами для восстановления после нагрузок.

Какие блюда можно готовить из черники

• Варенье.
• Джемы.
• Конфитюры.
• Компоты.
• Соки.
• Десерты.
• Добавляют в пироги, торты, йогурты и другие десерты.

Черника и диеты для похудения

Черника является любимой ягодой диетологов США. Серьезно, большая часть рационов от зарегистрированных в этой сфере врачей содержит тот или иной вариант черничного смузи, заправки из этой ягоды в кашу или просто перекуса из чашки ягод и горсти орехов. Ничего странного, сладкий вкус и высокое содержание витаминов и антиоксидантов делает ягоду абсолютным фаворитом здорового питания. А низкая калорийность позволяет лакомиться почти «безнаказанно».

Доказано, что употребление черники повышает «переносимость» диеты, то есть снижает количество срывов. Ягоду рекомендуют употреблять до 3 120 г порций в сутки, если нет аллергической реакции.

Зато продукт полностью запрещен на белковых диетах и Аткинса. Сторонники первого автора могут поесть ягод в завершающей фазе диеты, но пока худеют - нет. В народе распространена и суровая монодиета на ягодах - полтора кило продукта, сколько угодно воды, никакой больше еды. Такие вещи полезными не являются, сколько бы их сторонники не рассуждали о «живости» питания. Живенько практик таких вещей будет только «очищать организм».

В итоге, он столкнется с риском обезвоживания, существенным падением уровня половых гормонов (жиров-то в диете нет) и большим риском потери мышечной массы. Если делать такие вещи часто, они могут стать причиной замедления метаболизма, и очень низких «поддерживающих» калорий для нового веса. Сторонницы таких диет годами вынуждены жить на 1400 ккал в сутки, просто чтобы не поправляться.

Плоды черники - Fructus Myrtilli

Черника обыкновенная - Vaccinium myrtillus L.

Сем ейство вересковые - Ericaceae

Другие названия:

- черница

- чернижник

- чернишник

- черничник

- чернега

Ботаническая характеристика. Кустарничек высотой до 30 см. Стебель круглый, прямостоячий, ветвистый, бурый, на зеленых ветвях заметны грани. Листья очередные, округло-яйцевидные, простые, короткочерешковые, с пильчато-зубчатым краем. Цветки мелкие, одиночные, обоеполые. Венчик кувшинчатый, зеленовато-розовый, с 5 отогнутыми зубцами, поникающий, на коротких цветоножках, расположен в пазухах листьев. Плод - черная шаровидная ягода с мелкими семенами. Цветет в мае-июне, плоды созревают в июле-августе.

Распространение. Северная и средняя части России, Беларусь, Украина, Сибирь. На Кавказе растет другой вид черники.

Местообитание. В еловых, сосновых и смешанных лесах, на верховых болотах, преимущественно в увлажненных местах, часто образует большие заросли, удобные для заготовки.

Заготовка. В период полного созревания утром или вечером. В последнее время при заготовке ягод используют средства малой механизации - ковш с зубцами, но часто после применения ковша для сбора (самоделки) сильно повреждаются листовые и плодоносящие почки, что способствует резкому сокращению урожайности. При заготовке не следует брать зеленоватые и испорченные плоды, ветви, листья. Собранные вручную плоды складывают в корзины или ведра. Не разрешается ягоды мыть и перекладывать из одной тары в другую. В фазе цветения собирают побеги черники, стараясь не повредить цветки, плоды.

Отличительные признаки плодов черники и возможных примесей

Название растения	Диагностические признаки
		форма и число семян или косточек
Съедобные ягоды
Черника обыкновенная - Vaccinium myrtillus L.	Шаровидные, вверху с остатком чашечки в виде кольцевой оторочки, в центре ямочка. Мякоть черно-фиолетового цвета.	Семена продолговатые, мелкие, многочисленные.	Сладковато-вяжущий.
Голубика обыкновенная - Vaccinium uliginosum L.	Овальные, крупнее плодов черники, с восковым налетом, с остатком чашечки в виде кольцевой оторочки и ямочкой. мякоть зеленая.		Сладкий, слегка вяжущий.
Смородина черная - Ribes nigrum L.	Шарообразные, с пленчатым конусовидным остатком околоцветника на верхушке. Поверхность усажена желтыми железками, заметными в лупу.	Семена гладкие, многочисленные, крупнее, чем у черники.	Кисло-сладкий, запах ароматный.
Черемуха обыкновенная - Padus racemosa Gilib.	Шарообразные, серовато-черного цвета с белым налетом от выделившегося сахара и круглым белым рубцом от плодоножки.	Косточка одна, округлой формы.	Кисловато-сладкий, сильновяжущий.
Несъедобные ягоды (недопустимые)
Бузина черная - Sambucus nigra L.	Шаровидные, мелкие, вверху остаток чашечки в виде кольцевой оторочки, в центре ямочка. Мякоть темно-красная.	Семянки (3) продолговатые, поперечно-морщинистые.	Кисловато-сладкий.
Крушина ольховидная - Frangula ainus Mill.		Косточки (2) плоские с клюво-видным выростом.	Вызывает рвоту.
Жостер слабительный - Rhamnus cathartica L.	Шаровидные, черные, блестящие.	Косточки (3-4) трехгранные, с 2 плоскими и 1 выпуклой сторонами.	Сладковато-горький.
Можжевельник обыкновенный - Juniperus communis L.	Гладкие, шаровидные, неморщияистые, вверху - трехлучевой шов.	Семена (3) гладкие, светло-желтые, угловатой формы.	Сладкий. Запах ароматный.

Охранные мероприятия. При планировании заготовок следует учитывать периодичность плодоношения черники. Необходимо чередовать массивы заготовок.

Сушка. Плоды раскладывают тонким слоем на солнце на 2-3 дня, а затем высушивают в русских печах, плодоовощных или других отапливаемых сушилках, периодически перемешивая. Сушат, пока ягоды перестанут пачкать руки и слипаться в комки.

Внешние признаки. По ГОСТу и ГФ XI плоды заготавливают во время созревания. Высушенные плоды сильно морщинистые, мелкие, после размачивания принимают шаровидную форму; черные, с сизоватым налетом, диаметром до 10 мм. На верхушке плода виден остаток чашечки в виде небольшой кольцевой оторочки. В красно-фиолетовой мякоти плода находятся многочисленные мелкие семена яйцевидной формы. Запах слабый. Вкус кисло-сладкий, слегка вяжущий. При жевании слюна окрашивается в темно-красный цвет, зубы и слизистая оболочка рта - в сине-фиолетовый. Снижают качество сырья недозрелые и подгоревшие плоды, другие части растения, плоды других растений, минеральные примеси.

Качественные реакции. Отвар плодов (1:10) имеет темно-фиолетовый цвет. При добавлении к отвару нескольких капель раствора NaOH появляется оливково-зеленое окрашивание (флавоноиды); при добавлении нескольких капель раствора ацетата свинца - аморфный осадок (дубильные вещества); при добавлении нескольких капель раствора железоаммониевых квасцов - черно-зеленое окрашивание (конденсированные дубильные вещества). При заготовке случайно попадают черные похожие ягоды. Присутствие других ягод в сырье не разрешается. Примеси можно обнаружить по признакам, указанным в таблице.

Химический состав. Ягоды черники содержат до 12% дубильных веществ пирокатехиновой группы; до 7% органических кислот, среди них лимонная, яблочная, янтарная, хинная, бензойная, молочная, щавелевая; до 30% сахара, 60 мг% аскорбиновой кислоты, 0,75-1,6 мг% каротина, 0,04% витаминов группы В. Черника содержит 6 мг% натрия, 51 мг% калия, 16 мг% кальция, 6 мг% магния, 13 мг% фосфора, 7 мг% железа, марганец.

Полифенольные соединения представлены антоцианами, лейкоантоцианами и катехинами. Количество полифенольных соединений увеличивается при лучшем освещении растений. В созревших плодах больше антоцианов (до 985 мг%), в полусозревших - больше катехинов и лейкоантоцианов.

В листьях черники найдены дубильные вещества (18-20%), сахара, арбутин (0,47-0,58%), гидрохинон (0,47%), сапонины (2,2-2,8%), органические кислоты (галловая, бензойная, лимонная, яблочная, уксусная, щавелевая, винная), минеральные вещества (калий, натрий, магний, кальций, железо, сера, фосфор, хлор, йод 1,9-2,4 мкг/кг). Важны в биологическом отношении гликозиды - неомиртиллин (2%), агликоном которого является витаминообразное вещество инозит, и миртиллин (1%), относящийся к антоциановой группе, агликоном его является красящее вещество.

Хранение. В мешках, на подтоварниках, на постоянном сквозняке, так как ягоды легко поражаются ягодной молью. Срок хранения 2 года.

Фармакологические свойства. Водные настои и отвары, спиртоводные настойки и экстракты листьев черники исследовались во многих странах. Препараты листьев черники оказывают кардиотоническое, мочегонное, желчегонное, вяжущее, противовоспалительное и противогнилостное действие. Препараты листьев в эксперименте на животных понижают содержание сахара в крови. Спиртоводные экстракты листьев предотвращают гибель собак с удаленной поджелудочной железой (животные, не получающие этих препаратов, погибают).

Спиртоводный экстракт и настой из листьев черники уменьшают содержание сахара в крови у кроликов с алиментарной и адреналиновой гипергликемией на 30-40%.

Ягоды черники обладают вяжущими, противогнилостными и противомикробными свойствами. Имеются сообщения, что антоцианы из плодов черники снижают агрегационную способность эритроцитов in vitro. Kapoтиноиды черники улучшают ночное зрение и функцию зрительного аппарата.

Лекарственные средства. Плоды в пачках, отвар, сбор "Арфазетин" (побеги черники).

Применение. Ягоды черники в виде отвара, киселя применяют как вяжущее средство при острых и хронических расстройствах желудочно-кишечного тракта, сопровождающихся поносом, при диспепсиях, связанных с усиленными бродильными и гнилостными процессами, при колитах, энтероколитах, дизентерии. Отвары черники используют местно при стоматитах и гингивитах в качестве вяжущего и антисептического средства.

Ягоды черники находят применение как диетическое и лечебное средство при циститах, легких формах сахарного диабета.

Листья и побеги употребляют при диабете, так как содержащийся в них гликозид неомиртиллин обладает способностью понижать содержание глюкозы в крови (в сборе "Арфазетин" - побеги черники).

Ягоды употребляют свежими, сушеными и в виде настоев. Настой готовят горячим и холодным способом. Холодный способ: 10 г измельченных ягод (4 чайные ложки сухих плодов) настаивают в стакане холодной кипяченой воды в течение 8 ч и принимают столовыми ложками в течение дня. Горячий способ: 2 чайные ложки измельченных ягод заливают стаканом кипятка, настаивают 2 ч и принимают в течение дня равными порциями. Настой применяют при желудочно-кишечных заболеваниях, сахарном диабете, используют при воспалительных заболеваниях полости рта и зева для полоскания.

Ягоды черники широко используют в пищу как лакомство, для изготовления варенья, компотов и киселей. Применяют при цинге, гиповитаминозах. Отмечено положительное влияние ягод черники (свежих, сушеных, в виде отвара, настоя, морса и т.д.) на остроту зрения.

Для лечения нарушений зрения предложен препарат "Дифрарель" (Франция), состоящий из биофлавоноидов ягод черники и (b-каротина, обладающий Р-витаминной активностью и применяемый для нормализации проницаемости капилляров, улучшения трофики тканей, ускорения регенерации, лечения артериопатий.

Черника – ягода, растущая на небольших кустарничках. Чаще всего ее собирают в лесу, однако, некоторые фермерские хозяйства занимаются самостоятельным разведением культуры. Плоды на кустарничках обычно не достигают больших размеров, их средний диаметр – 8 мм. Брать такую ягоду в лесу – дело кропотливое, хлопотное. Однако, учитывая ее витаминно-минеральный состав, оно так же и важное, и полезное.

Витамины – не единственные элементы, содержащиеся в чернике. Она также содержит основные питательные вещества, в число которых входят:

• белки – 1,1 г;
• жиры – 0,6 г;
• углеводы – 7,6 г;
• вода – 86 г;
• волокна пищевого типа – 3,1 г.

Витаминно-минеральный состав

Витамины в ягодках небольших размеров представлены веществами, принадлежащими к таким группам, как:

Благодаря тому, какие витамины в ягодках преобладают, их начали использовать в качестве лекарственного средства в далеком прошлом. В настоящее время черничные экстракты добавляют в определенные медицинские препараты, а также косметические средства, что позволяет организму дольше оставаться молодым и здоровым.

Полезные свойства

То, какие витамины и прочие вещества присутствуют в чернике, обуславливает ее положительное воздействие на человеческий организм. Это природный источник антиоксидантов, употребление которого позволяет очистить организм от отложений вредных веществ, особенно свободных радикалов. Кроме их выведения, использование черничных ягодок нейтрализует негативные последствия, появляющиеся после их длительного пребывания в организме.

К прочим полезным свойствам плодов небольших кустарничков относятся:

• предотвращение преждевременного старения кожных покровов, улучшение их состояния;
• улучшение циркуляции генетического материала по клеткам и тканям;
• снижение риска развития варикозного расширения вен;
• гомеостаз, восстановление роговицы глаза;
• снижения риска возникновения глазных патологий, в особенности тех, что проявляются с возрастом;
• предотвращение накопления холестериновых бляшек;
• укрепление сосудистых стенок;
• улучшение памяти;
• нормализация пищеварительных процессов;
• улучшение состояния организма при развитии геморройных кровотечений;
• оказание ингибирующего действия на различные патогены, вызывающие кишечные и прочие инфекционные заболевания;
• снижение риска развития сахарного диабета;
• защита печени от неблагоприятного воздействия свободных радикалов, поступающих из окружающей среды;
• нормализация показателей креатинина и прочих веществ, по которым определяется уровень работоспособности почек;
• предотвращения развития онкологических и сердечнососудистых заболеваний;
• улучшение процессов метаболизма, что способствует быстрому сжиганию подкожных жировых отложений.

Противопоказания к употреблению

Несмотря на информацию о том, какие витамины и прочие вещества преобладают в чернике, существуют определенные группы лиц, которым запрещено ее употребление в пищу. К ним относятся те, кто страдает следующими недугами:

• оксалатурией;
• непереносимостью салицилатов;
• заболеваниями поджелудочной железы;
• синдромом раздраженного кишечника;
• дискинезией желчевыводящих путей;
• панкреатитом;
• холециститом;
• холангитом;
• аллергическими реакциями на пищевые продукты.

Важно не употреблять плоды вместе с препаратами, способствующими разжижению генетического материала человека. Сбор ягоды должен производиться только в экологически чистых районах, так как все свободные радикалы и токсины, имеющиеся в почве, будут содержаться в них. Кроме того, не стоит вводить в детский рацион питания плоды, варенье из них, в том случае, если у ребенка наблюдаются стойкие аллергические реакции на различные пищевые продукты, отличающиеся ярким цветом.

Сохранение питательных веществ ягоды при заморозке

Информация о том, какие витамины и микроэлементы, содержит черника, заставляет многих задумываться о сохранении ее полезных свойств в зимний период. Свободная продажа ягод в это время практически не осуществляется, а если и производится, то ее стоимость слишком высока. По этой причине многие хозяйки обращаются к старому проверенному способу хранения ягод зимой – заморозке. Чтобы ягода сохранила все питательные элементы в течение длительного времени необходимо:

• перебрать ее, очистив от лесного мусора;
• разложить аккуратно по контейнерам, не помяв нижние слои;
• использовать режим быстрой заморозки;
• выставлять температуру не менее -18°С.

Важно помнить, что при подготовке ягоды к заморозке, ее нельзя мыть или даже смачивать водой.

Учитывая то, что кустарниковыми ягодами заинтересовались еще в древности, с тех времен о них было обнаружено много интересных фактов. Нераспространенными среди них выступают следующие:

• изготовление из ягод вкуснейшего, питательного меда красноватого оттенка;
• использование черничного сока в качестве одной из составляющих пищевых чернил;
• празднование во многих небольших городках, расположенных в лесистой местности, «черничных дней»;
• использование частей растения для произведения процесса дубления кож, а ягодного сока – для окрашивания шкур перед получением из них меха или тканевых волокон;
• наличие памятника ягоде в российском городе Красновишерске Пермского края и Закарпатском селе Гукливый в Украине;
• использование изображения ягоды на марке, выпущенной в СССР небольшим тиражом, имеющей в настоящее время большую ценность;
• употребление солдатами, принимающими участие во Второй мировой войне, большого количества черничных ягод для обострения способности четко видеть ночью (легенда, прикрывавшая начало использования радаров советскими воинами).